甘油三酯又称中性脂肪，由于其甘油骨架上分别结合了3分子脂肪酸、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸，相应称为甘油三酯(TG)、甘油二酯(DG)和甘油一酯(MG)。血清中90%～95%是TG，TG中结合的脂肪酸分别为油酸(44%)、软脂酸(26%)、亚油酸(16%)和棕榈油酸(7%)。

　　血清TG测定方法一般分为物理化学法、化学法及酶法三大类。

　　血清中TG的化学组成并不单一，准确求其分子较为困难。因标准不同，测定结果存在差异。化学法多采用三棕榈精(软脂精)(分子量807.3)、三油精(分子量895.4)为标准，按摩尔浓度计算。酶法测定以三油精为标准物进行换算。

　　1.化学法

　　化学测定法包括：①TG的抽提分离;②皂化;③甘油糖的氧化;④氧化生成甲掌显色定量等四个阶段。操作较为繁杂，影响测定因素太多，本法准确性差，一般很少用。

　　2.酶法测定

　　酶法测定包括：①TG的抽提与皂化;②加水分解生成甘油糖定量等二个阶段。目前常规检测应用的方法有甘油激酶(glycerolkinase,GK)法和甘油氧化酶(glycerol Oxidase,GOD)法。操作简便，快速准确，并能在自动化生化分析仪上进行批量测定。

　　一、乙酰丙酮法

　　1.原理

　　血清中加入异丙醇抽提取甘油三酯，经KOH皂化使甘油三酯水解生成甘油及脂肪酸，甘油在过碘酸作用下氧化成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色的3，5二乙酰，1，4二氢甲基吡啶，其颜色的深浅与甘油三酯的含量成正比，420nm测定定量。该法可用于基本功训练及组织细胞TG的提取测定。

　　2.试剂组成

　　代号种类浓度组成贮2-8℃有效时间

　　R1抽提液　(CH3)CHOH(A.R)重蒸馏

　　R2吸附剂　氧化铝，水洗除去微细颗粒，

　　110℃烤干3h以上闭封一周

　　R3皂化剂5%KOH 5g+H2O→100ml

　　R4醋酸溶液2mol/LCH3COOH 11.5ml+H2O→100ml

　　R5过碘酸钠0.05mol/LNaIO4 1.07g+H2O→100ml

　　R6氧化剂　R4 1体积+R51体积　一周

　　R7醋酸铵液　CH3COONH2 15.4g+H2O→100ml

　　R8显色剂CH3COCH2COCH30.75ml+R-1

　　40ml+R-7 100ml+R-4 80ml

　　R9参考液2mg/dl三油酸甘油酯

　　2mg+R-1→100ml(TG100mg/dl)

　　3.操作

　　按图15-3操作。

　　图15-3 血清甘油三酯(乙酯丙酮法)测定操作图

　　4.计算

　　血清TG浓度=ESA/EST×1.13(mmol/L)

　　二、酶法(GK-GPO-POD比色法)

　　血清中甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶(GK)及ATP存在下，生成3-磷酸甘油，尔后，在磷酸甘油氧化酶(GPO)作用氧化成磷酸二羟丙酮并生成H2O2，H2O2与底物4-氨基安替比林和ESPAS在过氧化物酶(POD)作用下，生成红色亚醌化合物(quinoneimine)，比色(500nm)，其颜色深浅与甘油三酯含量成正比。

　　(一)手工测定法

　　1.试剂组成

　　代号种类浓度贮存2～8℃

　　R1磷酸甘油氧化酶≥3.0KU/L冷藏

　　(A液)抗坏血酸氧化酶≥1.0KU/L

　　甘油激酶≥0.7KU/L

　　4-氨基安替比林80mg/L

　　R2脂蛋白脂酶≥2.0KU/L冷藏

　　过氧化物酶≥10KU/L

　　ESPAS300mg/L

　　R3(参考液)甘油酸三脂200mg/dl(2.26mmol/L)冷藏

　　*：一般采用商品试剂盒

　　图15-4 血清甘油三酯测定法(酶法)操作图

　　2.操作

　　按图15-4操作。

　　3.计算

　　血清TG浓度=ESA/EST×2.26(mmol/L)

　　(二)生化分析仪检测

　　全自动生化分析仪测定操作(以CL-7200型为例)。

　　1.试剂

　　A液：GK，GPO，4-AA-P、抗坏血酸氧化酶等。

　　B液：POD，Lipase,ESPAS等。

　　标准液：甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L)。

　　2.上机参数

　　名称参数

　　方法终点法

　　波长双波长(540nm 700nm)

　　试剂A反应时间2～3min

　　试剂B反应时间5～6min

　　反应温度37℃

　　样本用量4μl

　　试剂A用量200μl

　　试剂B用量100μl

　　单位mmol/L

　　3.操作过程

　　4.计算

　　以△A=A2-A1并根据同样之标准或质控物计算，自动打印结果。

　　5.注意事项

　　①试剂与样本量可根据分析仪要求按比例改变。

　　②试剂在有效期内2～8℃避光保存。

　　③样本中甘油三酯含量超过11mmol/L需用生理盐水稀释后再测。