磷脂(PL)并非单一的化合物，其分子内含有磷酸基的多种脂质，磷脂是这一类物质的总称。血中PL包括：①卵磷脂占60%和溶血卵磷脂占2%～10%;②磷脂酰乙醇胺等，占2%;③鞘磷脂，占20%。

　　血清PL定量方法包括测定无机磷的化学法和酶法两大类。

　　1.化学测定法过程包括：①抽提分离;②灰化;③显色、比色的三个阶段。

　　2.酶测定法

　　可分别利用磷脂酶A、B、C、D等4种酶作用，加水分解，测定其产物，对PL进行定量。一般多采用磷脂酶D(PL-D)进行定量。PL-D可作用于含有卵磷脂、溶血卵磷脂和鞘磷脂以及含胆碱的磷脂，这三种磷脂约占血清总磷脂的95%。本法快速准确，便于自动生化分析仪器进行批量检测。

　　相关

　　一、化学法(消化法)

　　1.原理

　　以有机混合试剂(无水乙醇、乙醇)抽提血清中磷脂，再用浓硫酸和过氯酸消化抽提液中的脂类和其他有机化合物，用硝酸盐与磷反应生成有色化合物，比色定量。本法可用组织细胞磷脂的抽提定量。

　　2.试剂组成

　　代号种类浓度组成贮2～8℃有效时间

　　R-1抽提液　无水乙醇：乙醇=3:1

　　R-2消化液　用1L密器，加水约500ml，置冷水中缓缓加浓硫酸280ml到水中，冷却后加过氯酸(70%，AR)65ml，混匀，加蒸馏水至1000ml

　　R-3显色剂　钼酸铵(A.R)2.5g+无水醋酸钠8.2g，加蒸馏水溶解并稀释至1L，监用时取此液体9份加新配的VitC液(10%)1份，混合即可

　　R-4参考液(贮存液)1mg/L　称干燥KH2PO(A.R)0.4393g,溶于蒸馏水中，转移至100ml的容量中，用蒸馏水加至刻度。　冷藏

　　R-5参考应用液0.04mg/ml取贮存液2ml加至50ml容量中，加水至刻度　冷藏

　　3.操作

　　按图15-5操作。

　　4.计算

　　血清脂性磷浓度=ESA/EST×10(mg/dl)

　　血清磷脂(以卵磷脂计)=ESA/EST×10×0.3229(mmol/L)

　　图15-5 血清磷脂测定(消化法)操作图*采用带塞玻璃试管

　　相关

　　二、酶法

　　1.原理

　　磷脂酶D因特异性不高，能水解血清中卵磷脂，溶血卵磷脂和神经磷脂(三者占血清总磷脂的95%)，释放出胆碱，胆碱在胆碱氧化酶作用下生成甜菜碱和H2O2，在过氧化物酶作用下，H2O2，4-氨基安替比林、酚发生反应生成红色醌亚胺化合物，其颜色深浅与这三种磷脂的含量成正比，在500nm波长下比色计算结果为：

　　2.试剂

　　(1)酶应用液(参考配方)：每100mlTris-His缓冲液(50mmol/L，pH7.8)中含：

　　磷脂酶D45U

　　胆碱氧化酶100U

　　过氧化物酶220U

　　4-氨基安替比林12mg

　　酚20mg

　　CaCl2·2H2O8mg

　　TritonX-1000.2g

　　(2)标准液：纯卵磷脂，临用前配制，5mg/2.5ml蒸馏水(含TritonX-1000.5%)

　　3.操作

　　(1)标本采集：空腹12h抽静脉血，不抗凝，分离血清或抗凝血分离血浆。

　　(2)在3.0ml酶应用液中加入血清(浆)20μl，标准管加标准液20μl，空白管加水20μl，放置37℃水浴10min后，波长500nm，比色，空白管液调零。

　　4.计算

　　血清磷脂(mg/dl)=TA/SA×200

　　血清磷脂(mmol/L)=血清磷脂(mg/dl)×0.01292