临床上将C10以上的脂肪酸称为游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)或非酯化脂肪酸(nonesterifiedfatty acid,NFFA)，正常血清中含有油酸(18:1,W9)占54%，软脂酸(16：0)占34%，硬脂酸(18：0)占6%，是其主要的NFFA。另外还有月桂酸(12：0)、肉豆蔻酸(14：0)和花生四烯酸(20：4，W6，9，12，15)等含量很少的脂肪酸。与其他脂质比较，NFFA在血中浓度很低，其含量水平极易受脂代谢，糖代谢和内分泌机能等因素影响，血中NFFA半寿期为1～2min，极短。血清中的NFFA是与清蛋白结合进行运输，属于一种极简单的脂蛋白。

　　测定血清NFFA法有滴定法。比色法，原子分光光度法，高压液相层析法和酶法等。一般多以酶法测定。作NFFA测定的标本一定要注意在4℃条件下分离血清并尽快进行测定。因为血中有各种脂肪酶存在，极易也极快使血中TG和PL的酯型脂肪酸分解成非酯化的FFA，使血中NFFA值上升。贮存标本仅限于24h内，若保存三天，其值约升高30%，使结果不准确。

　　1.非酶法测定

　　非酶法测定包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高压液相层析法。前三种方法准确性差;高压液相层析法，仪器太昂贵，不便于批量操作。

　　2.酶测定法

　　主要用脂肪酶测定。血清中游离脂肪酸可分别测定酶水解后的产物乙酰CoA或AMP或辅酶A(CoA)进行定量。酶法测定结果准确可靠，快速，易于批量检测。测定原理如图15-6所示。

　　图15-6 血清主要FFA酶法测定图

　　□：内物质作为生成量与变化量进行测定;ACS：乙酰CoA合成酶;MK：肌激酶;　PK：丙酮酸激酶;POD：丙酮酸氧化酶;DTNB：α-磺基苯甲酸;ACO：乙酰CoA氧化酶;ACD：乙酰CoA脱氢酶。

　　一、亮度法

　　1.原理

　　血清中游离脂肪酸经抽提到高密度铜试剂中，形成铜皂在上层溶剂中，再用二苯卡巴肼与铜显色，进行定量。

　　2.试剂组成

　　代号种类浓度组成贮存2～8℃有效期

　　R-1抽提剂　氯仿：庚烷：甲醇=5：5：1(V/V)

　　R-2缓冲液33mmol/LKH2PO44.539g/L 100ml+Na2HPO4·2H2O5.983g/l 50ml调pH至6.4

　　R-3铜贮液500mmol/LCu(NO3)2·3H2o 12.07g加H2O→100ml

　　R-4三乙醇胺1.0mol/L三乙醇胺10ml，加水→100ml

　　R-5NaOH液1mol/L

　　R-6铜试剂　R-3 10ml+R-4 10ml+R-6 6ml

　　+H2O→100ml调pH至8.1

　　R-7二苯卡

　　巴肼液　二苯卡巴肼(乙醇)液(4g/L)10ml+R-4 0.1ml　临用前配制

　　R-8软脂酸标准贮存液2mmol/L软脂酸51.2mg溶于100ml R-1液冷藏

　　R-9R-8的应用液500μmol/L用R-1液稀释冷藏

　　3.操作

　　按图15-7操作。

　　4.计算

　　血清游离脂肪酸(μmol/L)=ESA/EST×500

　　二、酶法

　　1.原理

　　血清中游离脂肪酸或非酯化脂肪酸(NEFA)，经酶试剂作用生成紫色化合物，其颜色深浅与NEFA含量成正比。

　　2.试剂组成

　　代号种类组成浓度贮存贮存

　　R1缓冲液磷酸缓冲液

　　MgCl2液

　　去垢剂0.04mmol/LpH6.9

　　3mol/L

　　R2酶/辅酶乙酰CoA合成酶

　　抗坏血酸氧化酶

　　CoA

　　ATP

　　4-AAP

　　溶于10ml R1液中≥0.3U/ml

　　≥1.5U/ml

　　0.9mmol/L

　　5.0mmol/L

　　1.5mmol/L冷藏5日

　　R3酶稀释液苯氧乙醇

　　去垢剂0.3%(V/V)

　　R4　马来酰亚胺

　　该试剂与R3等体积混合10.6mmol/L

　　R5酶试剂乙酰CoA氧化酶

　　过氧化物酶

　　TOOS

　　混合上述试剂，再等体积R4试剂混合≥10U/ml

　　7.5U/ml

　　0.2mmol/L冷藏5日

　　R6标准液　1mmol/L冷藏

　　*应用带玻塞离心管

　　3.操作

　　按图15-8操作。

　　4.计算

　　图15-7 血清非酯化脂肪酸测定(光度法)操作图

　　图15-8 血清非脂化脂肪酸测定(酶法)操作图

　　(胡汉宁　储建中)