一、载脂蛋白测定方法

　　1.单向免疫扩散法(radialimmunodiffusion,RID)

　　该法较简单，一般实验室均可进行。消耗较多的抗血清，扩散过程至少24h，最多需72h，测定下限值为10μg/ml。该方法虽然简单，应严格控制有关条件如：含抗血清的琼脂糖凝胶厚度要均匀;加入小孔的稀释抗原(血清)量要准确;含ApoB的脂蛋白如VLDL和LDL颗粒大小不一，如琼脂糖凝胶浓度在1.5%～2.0%,可能仅测出LDL的ApoB，大颗粒的LDL及VLDL的ApoB可能无法测出，因为难以穿过琼脂糖凝胶的孔隙。另外，扩散过程中，凝胶板一定要水平，否则易使扩散环呈椭圆形，难以准确测量直径。一般使沉淀环以3.5～10.0mm为宜，应在两个方向测量直径，其精度要求达到0.1mm。采用五种不同浓度参考值，测定沉淀环面积对相应浓度关系以曲线回归方程作图。

　　2.电免疫测定法(electroimmunoassay,EIA)

　　该法灵敏，抗血清用量少，如琼脂糖缓冲液中加入聚乙二醇及甘氨酸，其电泳时间可缩短一倍，火箭峰高以1～4cm为宜，火箭峰的测量可以计算面积或峰高，峰高从中心量起。测量精度最好能在0.1mm,灵敏度约2μg/ml，又称为火箭电泳法。

　　3.免疫比浊法(immunoturbidimetryassay,ITA)

　　简便快速，在自动分析仪进行操作并能批量检测，是目前临床使用最多的方法学。免疫比浊法有两种：一是测定光散射的，又名免疫散射比浊法(INA);需用特殊的激光浊度仪;另一种是利用光度计测定通过混浊溶液后的透光强度，称为透射免疫比浊法(ITA)，其灵敏度低于INA。比浊法可以终点法和速率法测定，速率法是根据散射光强度与时间的关系，以微机处理计算出抗原抗体复合物形成的最大反应速度，后者与溶液中抗原量成正比，常可在1min内完成测定过程，可自动扣除空白;终点法比速率法稳定，一般多用终点法。

　　4.酶联免疫法(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)

　　该技术已广泛应用于极微量蛋白的定量测定，可测出ng级水平的抗原或抗体含量，该法可用于ApoE、C-Ⅱ、C-Ⅲ等含量较少的载脂蛋白的定量测定。

　　5.放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)

　　该法灵敏，抗血清用量少，所需设备较多，一般用125I标记抗原作为示踪物，除ApoC-Ⅰ(不含酪氨酸)以外，都可以作碘标记(氯胺T法)，以双抗体法测定RIA法可检测最低至3～5ng。临床检验中不常用此法，主要用于动物实验的科学研究工作。

　　还有荧光免疫法和化学发光法等灵敏度很高的方法。

　　血清载脂蛋白测定的方法，从测定原理、方法学评价及参考值，刘秉文和李健斋等人作了大量的工作，为国内的载脂蛋白测定的临床应用奠定了基础。周新曾于1986年首先在国内研制成功抗人ApoB100血清，其后，国内同仁陆续研制出ApoAⅠ、AⅡ、AⅣ、E、CⅡ、CⅢ抗血清，并广泛应用于临床的疾病诊断，在部分大医院已成为常规检查项目。

　　刘秉文在“脂蛋白与动脉粥样硬化“一书中全面总结了国内外载脂蛋白测定的方法学及其参考值，本节将引用如下比较表：

　　表18-1　ApoAⅠ免疫测定法的比较

　　RIAELISAEIARIDINAITA

　　抗体P，MP，MPP，MPP

　　灵敏度(n)0.3～100.1～0.5100100150100

　　测定范围(ng)1～2000.5～15100～500200～800200～500200～600

　　批内CV(%)3～94～83～563～71

　　批间CV(%)5～108～103～9106～76

　　正常值(g/L)1.0±0.21.5±0.21.2±0.21.2±0.11.2±0.21.7±0.2

　　P:多克隆抗体;M：单克隆抗体;RIA：放射免疫法;ELISA;酶联免疫法;RID：单向免疫扩散法;INA：免疫散射比浊法;ITA：免疫透射比浊法。

　　(源自：刘秉文，1995.)

　　表18-2 ApoAⅡ免疫测定法的比较

　　RIAELISAEIARIDINAITA

　　抗体PP，MPPPP

　　灵敏度(g)0.5　2053020

　　测定范围(ng)1～205～5030～6050～40050～90040～150

　　批内CV(%)785555

　　批间CV(%)978-76

　　正常值(g/L)0.25±0.40.35±0.050.76±0.20.29±0.020.37±0.090.36±0.03

　　(源自：刘秉文，1995.)

　　表18-3 ApoAⅣ免疫测定法的比较

　　RIAELISAEIA

　　抗体PPP

　　灵敏度(g)50.220

　　测定范围(ng)5～500.5～850～200

　　批内CV(%)53.605

　　批间CV(%)789

　　正常值(g/L)0.17±0.030.14±0.050.14±0.04

　　(源自：刘秉文，1995.)

　　表18-4 ApoB100免疫测定法的比较

　　RIAELISAEIARIDINAITA

　　抗体P，MP，MPP，MPP

　　灵敏度(n)5～102～2050～300300300300

　　测定范围(ng)0～1002～1020～50050～600300～500100～500

　　批内CV(%)4～84～71～73～74～72

　　批间CV(%)7～11103～106～77～82

　　正常值(g/L)0.9±0.20.85±0.10.6±0.30.8±0.20.8±0.20.8±0.3

　　(源自：刘秉文，1995.)

　　表18-5 ApoCⅠ免疫测定法的比较

　　RIAELISAINA

　　抗体PPP

　　灵敏度(n)1550

　　测定范围(ng)5～3015～100-

　　批内CV(%)735

　　批间CV(%)958

　　正常值(g/L)0.05±0.030.06±0.0020.06±0.01

　　(源自：刘秉文，1995.)

　　表18-6 ApoCⅡ免疫测定法的比较

　　RIAELISAEIARIDITA

　　抗体PPPPP

　　灵敏度(g)100.3454010

　　测定范围(ng)10～800.5～570～60040～60012～50

　　批内CV(%)636.52.13.3

　　批间CV(%)1088.23.96.2

　　正常值(g/L)0.04±0.010.033±0.0080.04±0.0020.039±0.0170.04±0.01

　　(源自：刘秉文，1995.)

　　表18-7 ApoCⅢ免疫测定法的比较

　　RIAELISAEIARIDINAITA

　　抗体PPPPPP

　　灵敏度(g)10.310762015

　　测定范围(ng)2～201～620～8076～60050～40030～120

　　批内CV(%)134.382.56.35.2

　　批间CV(%)134.383.56.35.2

　　正常值(g/L)0.15±0.060.16±0.030.12±0.040.127±0.0370.12±0.030.11±0.03

　　(源自：刘秉文，1995.)

　　相关

　　二、人血浆(清)载脂蛋白参考值比较

　　表18-8 ApoE免疫测定法的比较

　　RIAELISAEIARIDITA

　　抗体PP，MPPP

　　灵敏度(n)0.2～80.520355

　　测定范围(ng)0.8～1000.5～620～20050～30020～400

　　批内CV(%)6485.92

　　批间CV(%)9857.25

　　正常值(g/L)0.05±0.020.04±0.010.10±0.040.035±0.010.04±0.01

　　(源自：刘秉文，1995.)

　　表18-9 国人血浆ApoAⅠ含量与国外报道的比较

　　作者发表时间方法例数性别年龄均值±s(mg/dl)

　　张祖辉1998RID307男20-77122.1±13.7

　　刘秉文　　318女20-77125.5±15.9

　　李键斋等1986EIA291男+女19-50119±17

　　周新等*1990EIA692男13-85129.1±16.1

　　477女18-80130.5±14.2

　　Albers等1976RID20男+女11.5±7.3115.7±7.3

　　Cheung等1977RID172男20-65120±20

　　188女20-65135±25

　　Reman等1978RID95男40-49137±23

　　104女40-49137±23

　　Schonfelcl等1974RIA41男13-58100±35

　　34女16-58104±34

　　Karlin等197623男20-39130±3

　　19女20-39154±6

　　Avogaro等1978EIA60男20-60128±22

　　60女20-60134±20

　　Mordasini等1980EIA50男20-60113±9

　　50女20-60125±17

　　Miller等1980EIA8男34-70122±27

　　8女52-68149±20

　　Rosseneu等1981IAN12男29139±15

　　14女30147±24

　　Assmann等1982INA3032男20-65136±23

　　1367女20-60146±25

　　(源自：刘秉文，1995)

　　*：作者补充。

　　表18-10 国人血浆ApoAⅡ含量与国外报道的比较

　　作者发表时间方法例数性别均值±s(mg/dl)

　　罗静聪1988RID76男+女26.7±4.6

　　刘秉文1988ELISA41男+女24.2±5.9

　　胡维诚1987RID160男+女27.0±4.4

　　Curry等1976RID19男78.0±1.7

　　19女83.0±25

　　Cheung等1977RID172男33.0±5

　　188女36.0±6

　　Assmann等1977EIA15男34.1±5

　　15女38.3±5.5

　　Schonfeld等1977RLA29男+女40.5±8.9

　　Maupovic等1981ELA50男+女68.0±18

　　Goldberg等1980RIA50男25.0±1

　　50女26.0±1

　　De Backnev等1982INA70男+女43.0±6.9

　　Zech等1983RID27男+女24.0±0.6

　　Noma等1983RLA27男+女32.0±8.3

　　Nukita等1984EIA156男+女40.0±9

　　(源自：刘秉文，1995)

　　表18-11 国人血浆ApoB含量与国外报道的比较

　　作　者发表时间方法例数性别均值±s(mg/dl)

　　周新等1986EIA608男83.2±13.9

　　511女80.4±13.4

　　李健斋等1986EIA727男+女76±19

　　吴兆丰、刘秉文1987RID304男87.9±14.4

　　320女86.7±14.4

　　Albers等1975RIA349男+女81.0±20

　　Bantorich等1975RIA82男+女90.0±24

　　Bedford等1976RIA128男+女87.0±30

　　Schonfeld等1974RIA42男+女83.0±16

　　Brussaard等1980EIA60男+女63±16

　　Fruchart等1981EIA144男+女90

　　Curry等1978EIA38男90±2.0

　　36女88±11

　　Curry等1978RID20男+女87±26

　　Lees等1970RID64男+女83±25

　　Snuderman等1975RID31男82±22

　　Fievet等1979INA206男129±31

　　271女120±34

　　Heuck等1979INA68男+女82.0±23

　　Rossenue等1981INA70男92±13

　　Durrington等1976INA29男+女85±11

　　(源自：刘秉文，1995)

　　表18-12 国人血浆ApoCⅠ含量与国外报道的比较

　　作　者发表时间方法例数性别均值±s(mg/dl)

　　傅明德等1987ELISA202男7.6±2.5

　　214女8.0±2.3

　　Polz等1980RID10男+女6.9±2.0

　　Curry等1981ELA68男+女6.0±1.5

　　(源自：刘秉文，1995)

　　表18-13 国人血浆ApoCⅡ含量与国外报道的比较

　　作　者发表时间方法例数性别均值±s(mg/dl)

　　傅明德等1987ELISA202男5.2±1.9

　　241女4.9±1.8

　　范萍等1989RID67男+女3.9±1.7

　　Schonfeld等1979RIA93男+女3.9±1.4

　　Curry等1981EIA68男+女4.0±2.0

　　Kashyap等1977RIA32男+女5.0±0.4

　　(源自：刘秉文，1995)

　　表18-14 国人血清ApoCⅢ含量与国外报道的比较

　　作者发表时间方法例数性别均值±s(mg/dl)

　　傅明德等1988ELISA134男11.6±3.6

　　135女12.0±3.7

　　范萍等1989RID67男+女12.7±3.7

　　刘秉文等1987IRA21男+女9.2±2.1

　　Schonfeld等1979RID93男+女15.4±6.2

　　Curry等1980ELA54男+女10.9±3.0

　　Kashyap等1981RIA29男+女11.1±0.9

　　(源自：刘秉文，1995)

　　表18-15 国人血浆ApoE含量与国外报道的比较

　　作者发表时间方法例数性别均值±s(mg/dl)

　　刘铭锋、刘秉文等1987ELISA42男+女3.57±1.24

　　刘铭锋、刘秉文等1987ELA50男+女4.70±1.18

　　刘铭锋、刘秉文等1992RID116男3.95±0.98

　　122女4.00±1.32

　　张东升、夏辉明1991ELISA25男+女3.45±1.24

　　Blum等1980RIA26男+女3.6±1.3

　　Gregg等1984RIA12男+女4.8±1.2

　　Wesgraber等1984RIA　男+女5(3.5-7.0)

　　(源自：刘秉文，1995)

　　王抒、李健斋等于1996年报道283例血清各项载脂蛋白测定值及百分位数，如表18-16、18-17、18-18所示。这批数据是目前国内采用同一份标本检测脂质、脂蛋白和载脂蛋白项目最多的1次报道。除了作为参考值供临床应用外，并阐明了各项指标之间的相关性。笔者予以抄录，供参考。

　　表18-16 血脂与脂蛋白水平(mmol/L)

　　项目男(225例)女(58例)P值

　　TC4.87±0.735.16±0.84<0.05

　　TG1.27±0.661.25±0.71>0.05

　　HDL-C1.41±0.351.54±0.36<0.02

　　HDL2-C0.56±0.170.63±0.19<0.02

　　HDL3-C0.86±0.230.91±0.19>0.05

　　LDL-C2.95±0.683.13±0.12>0.05

　　(源自:王抒，1996)

　　表18-17 几项常用比值*

　　项　目男女

　　LDL-C/HDL-C2.21±0.722.16±0.80

　　HDL2-C/HDL3-C0.66±0.120.69±0.15

　　ApoB/ApoAⅠ0.72±0.160.74±0.17

　　ApoAⅠ/ApoAⅡ4.10±0.654.10±0.68

　　ApocⅡ/ ApoCⅢ0.39±0.120.41±0.16

　　男女组间无显著意义

　　(源自：王抒，1996)

　　表18-18 各项载脂蛋白测定值与百分位数

　　项目X±Sp5p25p50p75p95

　　男(225例)

　　ApoAⅠ(g/L)1.42±0.171.171.301.431.511.72

　　ApoAⅡ(g/L)0.36±0.660.280.320.350.400.46

　　ApoB(g/L)1.01±0.210.720.861.001.141.38

　　ApoCⅠ(mg/L)53±173143506083

　　ApoCⅡ(mg/L)34±161324314269

　　ApoCⅢ(mg/L)44±172634415174

　　ApoE(mg/L)44±172634415174

　　Lp(α)(mg/L)1441252653107185382

　　女(58例)

　　ApoAⅠ(g/L)1.45±0.141.211.341.441.551.74

　　ApoAⅡ(g/L)0.36±0.060.260.330.360.390.44

　　ApoB(g/L)1.07±0.230.710.901.081.201.49

　　ApoC(mg/L)53±183039516192

　　ApoCⅡ(mg/L)41±182028384977

　　ApoCⅢ(mg/L)104±405272100129184

　　ApoE(mg/L)51±183337485889

　　Lp(α)(mg/L)154±1163566117207464

　　国内的已有报道表明，人血清载脂蛋白参考值水平尚有一定的差异。引起这种差异的原因是多方面的，目前认为主要原因有：①检测方法与仪器不同;②试剂质量尤其是抗血清技术标准不统一;③国内尚未采用完全符合国际标准的定值血清;④人群的生活习惯及种族差异。为此对于国人的血清载脂蛋白参考值的确立，尚需付出艰辛的劳动。